GFP-CERTIFIED^® 細(xì)胞凋亡/壞死檢測(cè)試劑盒

GFP-CERTIFIED^® Apoptosis/Necrosis detection kit

可進(jìn)行區(qū)分正常細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的多重檢測(cè)，可與 GFP 和其他綠色熒光探針兼容。

●　可以兼容 GFP 和其他綠色熒光探針

●　容易區(qū)分正常細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞

●　已根據(jù)熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀等應(yīng)用進(jìn)行過優(yōu)化

●　適用于死亡途徑分析及藥物、毒素研究

從凋亡到壞死的過渡是一個(gè)松散定義的連續(xù)體。質(zhì)膜細(xì)胞外表面上磷脂酰siansuan（PS）的暴露仍是早期細(xì)胞凋亡的共同標(biāo)志。這時(shí)候在Ca²⁺存在下，磷脂結(jié)合蛋白例如 Annexin V 與 PS 具有親和力。由于 Annexin V 不具有細(xì)胞滲透性，所以這種胞外PS的結(jié)合是早期凋亡細(xì)胞對(duì)具有選擇性的。

同樣，質(zhì)膜完整性的喪失，如不具有膜滲透性DNA嵌入染料若能標(biāo)記出細(xì)胞核，則是表明晚期細(xì)胞凋亡和壞死的直接方法。考慮到Annexin V通常與熒光素（又稱FITC）偶聯(lián)，檢測(cè)綠色熒光蛋白（GFP）表達(dá)細(xì)胞中的凋亡時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)問題。以上兩個(gè)熒光團(tuán)的發(fā)射圖譜會(huì)發(fā)生光譜重疊，使信號(hào)之間的區(qū)分變得困難或不可能，從而損害了總體上的數(shù)據(jù)質(zhì)量。GFP-CERTIFIED^® 細(xì)胞凋亡/壞死檢測(cè)系統(tǒng)專為表達(dá)GFP的細(xì)胞系以及表達(dá)藍(lán)色或青色熒光蛋白（BFP、CFPs）的細(xì)胞而設(shè)計(jì)，同時(shí)也可以應(yīng)用于不帶熒光蛋白的細(xì)胞的凋亡和壞死的細(xì)胞。另外，本試劑盒適合用于活細(xì)胞或結(jié)合了探針（如標(biāo)記抗體、或與熒光素或xiangdousu顯示相似光譜特性的其他熒光偶聯(lián)物）的細(xì)胞。本試劑盒包含了用于確定細(xì)胞凋亡及壞死的早期和晚期階段中所需的全部試劑。Annexin V -EnzoGold（增強(qiáng)型Cyanine-3）偶聯(lián)物能夠檢測(cè)不同于熒光素或GFP的細(xì)胞凋亡。壞死檢測(cè)試劑（紅色）類似于發(fā)出紅色的染料7-AAD，可促進(jìn)晚期細(xì)胞凋亡和壞死檢測(cè)。本試劑盒還包含了可用作陽性對(duì)照的凋亡誘導(dǎo)劑（Staurosporine）。檢測(cè)試劑可單獨(dú)使用或分別與其他單獨(dú)或多重應(yīng)用組合使用。本試劑盒還可以通過流式細(xì)胞儀和熒光/共焦顯微鏡提供快速、準(zhǔn)確的檢查結(jié)果。

GFP、Annexin V-Cyanine 3 偶聯(lián)物和壞死檢測(cè)試劑（紅色）的激發(fā)（陰影線）和發(fā)光（固體）光譜。

三種染料都可以輕易地被 488 nm 激光源激發(fā)。所有熒光團(tuán)之間的發(fā)射峰值容易區(qū)分。

GFP-CERTIFIED^® 細(xì)胞凋亡/壞死檢測(cè)試劑盒（ENZ-51002）

流式細(xì)胞儀。用0.2％DMSO（panel A）模擬誘導(dǎo) Jurkat 細(xì)胞，或用 2 μM 星形孢菌素（panel B）在37°C下誘導(dǎo) Jurkat 細(xì)胞４h。經(jīng)過處理后，在含有 Annexin V-Cyanine 3 和壞死檢測(cè)試劑（紅色；一種遠(yuǎn)紅色發(fā)光的 DNA 嵌入染料）的緩沖液中孵育細(xì)胞，然后用 488 nm 激光的流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析，用 FL2（細(xì)胞凋亡）和 FL3（壞死）通道進(jìn)行熒光檢測(cè)。

模擬誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和壞死主要呈陰性。處理４h 后，會(huì)出現(xiàn)３種細(xì)胞群：

（1）可以存活且不凋亡、不壞死的細(xì)胞（Annexin V-Cyanine 3、壞死檢測(cè)試劑呈陰性）；

（2）正在經(jīng)歷凋亡的細(xì)胞（Annexin V-Cyanine 3 呈陽性和 NDR 呈陰性）；

（3）處于晚期凋亡和早期壞死的細(xì)胞（Annexin V-Cyanine 3 和壞死檢測(cè)試劑呈陽性）。

用 2.5 µM 星形孢菌素刺激 Jurkat 細(xì)胞 0-6 h。使用 Jurkat 懸浮細(xì)胞的流式細(xì)胞儀結(jié)果表現(xiàn)為早期凋亡（Annexin V-EnzoGold）和晚期凋亡/壞死（Annexin V-EnzoGold 和壞死染色）。

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